液相色谱的柱子通常分为正相柱和反相柱。正相柱大多以硅胶为柱,或是在硅胶表面键合-CN,-NH3等官能团的键合相硅胶柱;反相柱填料主要以硅胶为基质,在其表面键合非极性的十八烷基官能团(ODS)称为C18柱,其它常用的反相柱还有C8,C4,C2和苯基柱等。
C18色谱柱的使用:
1、 新柱子在使用前需用纯有机试剂(如甲醇、乙腈)低流速冲洗,冲洗体积以20倍柱体积为宜,以便固定相能充分润湿、碳链能舒展*,使色谱柱的性能达到状态;
2、 使用时需在每日实验结束后冲洗色谱柱,尤其是流动相中含有酸或盐时,需将色谱柱中的酸或盐冲洗干净,通常建议用10%甲醇水冲洗20倍柱体积;
3、 长期保存前要将色谱柱*冲洗,建议冲洗3-4小时以上,后保存在纯有机试剂或高比例的有机试剂溶液(如90%甲醇水)中;
4、 日常保存溶剂(即第二天需继续使用时)尽量与3中相同;
5、 由于C18柱(极性改性处理的除外)的固定相疏水性较强,在使用过程中尽量不要使用高水相条件,若水相比例过高,易引起固定相疏水塌陷,导致柱效迅速下降,甚至造成不可逆的负面影响,建议使用过程中水相比例不超过90%;
6、 色谱柱压力升高、柱性能下降:通常为色谱柱被污染,对色谱柱进行再生处理可恢复部分柱效;
7、 色谱柱压力骤升,通常由盐析出或筛板堵塞引起。若是盐析出,用10%甲醇水低流速冲洗至压力恢复即可;若判断并非盐析出,以纯甲醇或10%甲醇水为流动相反冲色谱柱(将色谱柱反接,不接检测器),若反冲半小时仍无效果,则需寻找其他原因。