色谱柱基本上是每个实验室的一种实验室耗材,当使用效果已经无法满足实验需求的时候,就需要考虑更换新的色谱柱了。
那么如何判断更换新色谱柱的时间呢?
(1)使用压力、分离度和峰形的混合指标来考察一根色谱柱的状态。
压力的测量是最容易的,通常我们确定的色谱方法要满足以下的要求:用新柱子时柱压不高于2500psi,在任何情况下压力都不超过3000psi。有统计表明,超过60%的色谱柱损坏是由于压力过高的原因。
分离度是考察色谱柱的一个非常重要的指标,只要两个组分可以获得基线分离,对该分析物的定量就不会有什么问题。对于对称的高斯峰来讲,1.5的分辨率即可得到基线分离;若Rs在1.7至2.0之间则更好。若峰拖尾严重则需要更高的分辨率。使用分辨率作为色谱柱的评价指标的好处在于我们可以直观地看到相邻的峰的分离情况。
(2)另外一个考察色谱柱质量的标准是峰形拖尾情况。
厂家测试报告的峰形都非常漂亮,但这并不代表该色谱柱分析实际样品的情况。通常,在开发分析方法的过程中,一般会试验几根色谱柱,分析足够多的实际样品,就知道当分离变差时是什么样的情况。