高效液相色谱柱以乙烯醇共聚物为基质的色谱柱,即使其载炭量很高也能保持表面的湿润。多孔结构具有足够大的平均孔径,对小分子化合物、多肽和小分子蛋白能够产生理想的分离效果。
在有机溶剂比例较高的流动相中,该柱具有与硅胶基质色谱柱相同的柱效,但在碱性缓冲溶液为流动相条件下,其分离效率则超过硅胶色谱柱。显著的特点之一是基质被烷基化的填料的洗脱顺序,其保留能力与碳链长度成正比。
高效液相色谱柱堵塞要怎么办?
如果是遇到堵塞的情况,先要确定堵塞是由于什么原因引起的,如果是由于色谱柱中残留的缓冲盐引起的,这是轻微的堵塞了,可以尝试用高比例的水相在较高的温度下冲洗色谱柱。
如果是由于样品原因导致色谱柱堵塞,又要考虑另外的办法,如果是样品中含有太多吸附性很强的物质(有时是复杂样品中的某些杂质,无法通过过滤离心等办法去除)沉积吸附在柱头导致堵塞,可以尝试使用不同的溶剂(对此类物质有较好溶解性的)慢慢冲洗。
如果是由于样品过滤不当或者样品在色谱柱上析出导致某些颗粒杂质堵塞了色谱柱,除了尝试寻找合适溶剂冲洗之外,只能考虑反冲了,通常,不建议反冲色谱柱,因为可能对色谱柱造成较大损害,所以反冲是迫不得已的死马当活马医的办法,一定要慎用。做好样品的前处理并使用预柱或在线过滤器才是保护色谱柱的好办法!