解决方案——食品中维生素C的测定
抗坏血酸,是一种多羟基化合物,化学式为C6H8O6,具有2个手性碳原子,分为L-抗坏血酸和D-抗坏血酸。L-抗坏血酸为左式右旋光抗坏血酸,具有强还原性,对人体具有生物活性;D-抗坏血酸又称异抗坏血酸,具有强还原性,但对人体无生物活性。
L-抗坏血酸,常称维生素C,广泛存在于新鲜的蔬菜水果中,如西红柿、菜花、柿子椒、深色叶菜、苦瓜,柑橘、柚子、苹果、葡萄、猕猴桃、鲜枣等;人工合成维生素常添加于功能饮料、功能性保健食品中,作抗氧化作用,清除自由基、促进抗体形成及参与人体内许多重要的生物合成反应。
D-抗坏血酸是以葡萄糖等为原料,经发酵制得的2-酮基-D-萄糖酸,再经酯化、酸化、精制等步骤生产的食品添加剂,一般作护色剂和防腐剂,常用于肉类制品、鱼肉制品、水果罐头等食品加工中,防止细菌生长、与亚硝酸盐、硝酸盐合用提高肉类制品的发色效果。
《食品安全国家标准 食品中抗坏血酸的测定GB 5009.86-2016 》规定了L-抗坏血酸和D-抗坏血酸的测定,但不同构型的抗坏血酸在食品中作用差异巨大,因此,考察L-抗坏血酸和D-抗坏血酸的分离度、方法稳定性和结果重现性至关重要。
抗坏血酸属于大极性化合物,在C18柱上保留弱、出峰时间过早,容易与溶剂峰发生重叠,影响抗坏血酸的定性和定量。但我们可以从两方面来增强抗坏血酸在色谱柱上的保留,避免溶剂峰干扰:一点、流动相中加入离子对试剂,延长抗坏血酸的保留时间;二、使用混合模式的色谱柱Acclaim Mixed-Mode WAX-1,拥有疏水性烷基链和可电离的叔胺末端,提供疏水性反相保留和弱阴离子交换,大大提高了极性化合物在色谱柱上的保留能力。
解决方案 | 加入离子对试剂 | 使用混合模式色谱柱 |
色谱柱 | 普通C18色谱柱 | Acclaim Mixed-Mode WAX-1 |
流动相 | A: 6.8g磷酸二氢钾和0.91g十六烷基三甲基溴化铵,用水溶解,磷酸调节pH至2.5~2.8,定容至1L, B:甲醇; A: B=98:2 | A: 25mM磷酸氢二铵(磷酸调pH至6.0), B:乙腈; A: B=98:2 |
流速 | 0.7mL/min | 0.8mL/min |
波长 | 245nm | 245nm |
优缺点 | 离子对试剂——十六烷基三甲基溴化铵使抗坏血酸得到保留,但方法不稳定,连续进样保留时间会往后漂移,且L-抗坏血酸和D-抗坏血酸分离度也会变差。 | 未使用离子对试剂,流动相为常规试剂,不会对色谱柱造成不可逆的损伤;方法稳定,重现性好。 |
推荐指数 | ★★★ | ★★★★★ |
Acclaim Mixed-Mode WAX-1测试维生素C谱图
L-抗坏血酸和D-抗坏血酸连续6针进样,保留时间RSD均小于0.5%,响应值RSD均小于1.0%。
色谱柱信息 | |
名称 | Thermo Scientific™ Acclaim Mixed-Mode WAX-1 |
规格 | 5 μm, 4.6×250 mm |
货号 | 064985 |
参考文献:
Thermo Scientific™ application, Acclaim Mixed-Mode WAX-1 应用于食品中L-抗坏血酸和 D-异抗坏血酸的测定
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