影响色谱柱性能的物理参数有哪些？

HPLC（高效液相色谱）是一种常用的分析技术，被广泛应用于化学、生物、医药等领域。色谱柱是HPLC系统中的核心部件，通常由填料材料和柱壁组成。填料材料可以是各种各样的，比如疏水相和亲水相。而柱壁则是填料与流动相之间的隔离层，它能够保护填料的结构，同时也能影响分离效果。

 

影响色谱柱性能的物理参数有哪些？

 

(1) 硅胶纯度

 

硅胶纯度和残留金属离子浓度，硅胶的杂质会影响化合物的峰形，硅胶表面的金属含量高会影响碱性化合物的峰形，易发生拖尾。

 

(2) 色谱柱尺寸

 

填料床的长度和内径，增加色谱柱长度，可以在一定程度上提高柱效，但也会升高压力和导致峰展宽；宽柱径，提高载样量，但也会增加横向扩散，同样会导致峰展宽。窄柱径可以节约溶剂，可减少横向扩散，但压力较大，对系统要求较高。

 

(3) 颗粒形状及粒径

 

球形颗粒柱效高、重现性好、柱床结构均匀，不规则形柱床结构不均匀、流动相线速度不均匀，容易谱带展宽；平均颗粒直径，粒径越小，柱效越高，柱压也越高。粒径分布越广则柱效越低，压力越大。

 

(4) 颗粒表面积

 

颗粒外表面和内部孔表面的总和，以m2/g表示，相对而言高表面积对样品具有较强的保留能力，更大的柱容量和分离度。而低表面积能更快达到平衡状态，更适合梯度洗脱程序。

 

(5) 孔径

 

颗粒的孔或腔的平均尺寸，范围是80~300Å，大孔径的填料颗粒可以延长大分子溶质在填料表面的滞留时间，改善分离，所以大孔径填料适合分离大分子化合物或者水动力体积较大的分子。